血清通常在細(xì)胞培養(yǎng)中作為基礎(chǔ)生長(zhǎng)培養(yǎng)基的添加劑。常用血清是胎牛血清(FBS),也稱(chēng)FCS。胎牛血清是從適合人類(lèi)衛(wèi)生習(xí)慣的農(nóng)場(chǎng)收集的。有時(shí),也可能用其他的牛血清,如新生牛血清或者供體牛血清。在細(xì)胞培養(yǎng)中,血清供應(yīng)了豐富的高分子蛋白,低分子量營(yíng)養(yǎng)物,疏水載體蛋白和其他體外細(xì)胞生長(zhǎng)必要的成分如激素和粘附因子。同時(shí),血清可以增加培養(yǎng)基的緩沖能力或中和有毒成分,起到保護(hù)細(xì)胞的作用。在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中是否選擇添加血清,主要根據(jù)基礎(chǔ)培養(yǎng)基化學(xué)成分,培養(yǎng)細(xì)胞的類(lèi)型和培養(yǎng)體系而定。
1、采集
在胎牛血清生產(chǎn)過(guò)程中,全血使用無(wú)菌一次性塑料袋收集,待凝結(jié)后分離,收集和冷凍儲(chǔ)存血清??刂铺ヅQ宓某跏际占强刂平K血清產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵因素。只有初始原料符合我們的規(guī)范時(shí)才能允許生產(chǎn)。
2、血清原料
在市場(chǎng)存在兩個(gè)胎牛血清標(biāo)準(zhǔn):美國(guó)農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)(USDA)和歐洲標(biāo)準(zhǔn)。美國(guó)農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn),原始血清必須采自未發(fā)生瘋牛?。˙SE)和口蹄疫(FMD)疫情的國(guó)家,才可自由進(jìn)口到任何國(guó)家,用于安全生產(chǎn)。而且研究者只有使用符合這種標(biāo)準(zhǔn)的血清,才被允許將其細(xì)胞和細(xì)胞產(chǎn)品送至其他同樣有嚴(yán)格進(jìn)口條款的國(guó)家,進(jìn)行合作交流。
3、處理過(guò)程
優(yōu)選數(shù)個(gè)批次凍存血清進(jìn)行解凍,檢驗(yàn)其內(nèi)毒素和血紅素的含量,滿(mǎn)足標(biāo)準(zhǔn)的才能在冷藏條件下充分混合繼續(xù)加工,進(jìn)一步進(jìn)行過(guò)濾除菌。BioInd依次通過(guò)預(yù)過(guò)濾和膜過(guò)濾來(lái)處理胎牛血清。zui后的過(guò)濾步驟為連續(xù)三次用100nm的濾膜過(guò)濾。過(guò)濾結(jié)束,血清采用無(wú)菌工藝進(jìn)行分裝,整個(gè)過(guò)程有效確保zui終產(chǎn)品無(wú)菌。血清生產(chǎn)的空氣潔凈度為100級(jí)。所有分裝工作臺(tái)都通過(guò)高效微??諝膺^(guò)濾器過(guò)濾,并保持正壓分裝環(huán)境,對(duì)總微粒、懸浮微粒數(shù)和壓力進(jìn)行監(jiān)控。分裝后,終產(chǎn)品迅速-20度凍存,并隔離,直到所有的質(zhì)量控制檢測(cè)完成。
4、FBS質(zhì)量控制
每批胎牛血清檢測(cè)確認(rèn)符合各項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn),并以書(shū)面的方式記錄在質(zhì)檢報(bào)告中。
具體優(yōu)勢(shì):
本胎牛血清不僅適用于常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng),更適合用于一些要求較高的細(xì)胞的培養(yǎng)。
血清憑借其優(yōu)良的品質(zhì)、*的可靠性和良好的技術(shù)支持,贏得廣大研究人員的信任。
本胎牛血清從血液收集到終產(chǎn)品檢驗(yàn)和審核的每一個(gè)步驟,都采用設(shè)備和標(biāo)準(zhǔn)操作程序,保證高品質(zhì)和各批次的一致性。所有操作符合GMP (Good Manufacturing Practices for Drug)標(biāo)準(zhǔn)。
本產(chǎn)品符合美國(guó)的FDA質(zhì)量體系要求,pH值、滲透壓、血紅蛋白濃度、內(nèi)毒素水平、總蛋白等多項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)合格,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體及病毒污染,具有高質(zhì)量和高穩(wěn)定性。
本胎牛血清來(lái)源清晰,具有可追溯性。本血清來(lái)源于澳洲。
本胎牛血清為*制品,不含任何人為的添加成分,可應(yīng)用于各種常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng),特別適合于一些要求較高的細(xì)胞的培養(yǎng),為細(xì)胞提供必須的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和多種生長(zhǎng)因子,有效促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。
胎牛血清使用中的常見(jiàn)問(wèn)題(不*整理)
1、如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清,并避免反復(fù)凍融。
我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí),請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶,建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
2、血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?
沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里(一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀,因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以,使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃,沉淀會(huì)自然消失。
3、實(shí)驗(yàn)室如何選擇適合的血清?
國(guó)內(nèi)一致認(rèn)為HYCLONE的血清是好的,但是根據(jù)我在北美的經(jīng)歷,國(guó)外一般認(rèn)為GIBCO比HYCLONE好,所以并不是價(jià)格決定質(zhì)量,但是總的來(lái)說(shuō)這兩種價(jià)格普遍偏貴,一般不是太嬌氣的細(xì)胞,國(guó)產(chǎn)的就夠用了。此外,由于國(guó)內(nèi)HYCLONE,GIBCO并沒(méi)有生產(chǎn)線(xiàn),我們只能從代理商那里買(mǎi),而代理商又魚(yú)龍混雜,所以買(mǎi)到假貨的可能性也很大。所以,我一般會(huì)從直銷(xiāo)員那里買(mǎi)血清,有的國(guó)外生物公司由于剛剛進(jìn)入中國(guó),度不高,但是其實(shí)在國(guó)外已經(jīng)做得很不錯(cuò)了,如Wisent等,他們?cè)趪?guó)內(nèi)有辦事處,我會(huì)從那里拿,血清的品質(zhì)和HYCLONE不相上下,但價(jià)格相對(duì)優(yōu)惠很多。
4、 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?
按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:
(1)解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
(2) 血清分裝凍存時(shí),須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。
(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
(4) 勿將血清置于37℃太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。
(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此步驟。
(6) 若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高,時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。