磁珠是發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新的免疫學(xué)技術(shù),它將固化試劑*的優(yōu)點(diǎn)與免疫學(xué)反應(yīng)的高度特異性結(jié)合于一體,以免疫學(xué)為基礎(chǔ),滲透到病理、生理、藥理、微生物、生化以及分子遺傳學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域,其在免疫檢測(cè)、細(xì)胞分離、生物大分子純化和分子生物學(xué)等方面得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。
技術(shù)應(yīng)用:
用MACS 細(xì)胞分選系統(tǒng)可以分離出非常純的細(xì)胞群體,而且有較好的回收率和存活率。依據(jù)細(xì)胞頻率和標(biāo)記表達(dá)水平的不同,MACS分離細(xì)胞的純度可達(dá)95%-99.9%,回收率>90%。
分離原理:
免疫磁珠法分離細(xì)胞是基于細(xì)胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結(jié)合,在外加磁場(chǎng)中,通過(guò)抗體與磁珠相連的細(xì)胞被吸附而滯留在磁場(chǎng)中,無(wú)該種表面抗原的細(xì)胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結(jié)合而沒(méi)有磁性,不在磁場(chǎng)中停留,從而使細(xì)胞得以分離。
應(yīng)用方法:
免疫磁珠應(yīng)用分為正選法和負(fù)選法:
正選法-磁珠結(jié)合的細(xì)胞就是所要分離獲得的細(xì)胞;
負(fù)選法-磁珠結(jié)合不需要的細(xì)胞,游離于上清液的細(xì)胞為所需細(xì)胞;
一般而言,負(fù)選法比正選法的磁珠用量大。
磁珠大小在0.1-0.45mm 包被了生產(chǎn)的高質(zhì)量單抗磁珠已為白細(xì)胞亞群的分選所優(yōu)化 將包被了特異性單抗的BD IMag磁珠加入細(xì)胞懸液,磁珠特異性地與有相應(yīng)抗原的細(xì)胞亞群結(jié)合,通過(guò)分離得到的連有磁珠的細(xì)胞可直接用于功能試驗(yàn)和用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
磁分離細(xì)胞的重要指標(biāo)是:
純度和得率,這取決于磁珠所連接單抗的特異性和磁珠大小(磁性),然而太小的磁珠得率不高,太大的磁珠又會(huì)影響細(xì)胞活性,也無(wú)法直接上流式。